Efficacy of factory-treated and dip-it-yourself long lasting insecticide-treated bednets against cutaneous leishmaniasis vectors in the sub-Andean region of Colombia: results after two years of use

BACKGROUND Long lasting insecticide-treated nets (LLINs) may be effective for vector control of cutaneous leishmaniasis (CL). Their efficacy, however, has not been sufficiently evaluated. OBJECTIVE To evaluate the large-scale efficacy of LLINs on Lutzomyia longiflocosa entomological parameters up to two years post-intervention in the sub-Andean region of Colombia. METHODS A matched-triplet cluster-randomised study of 21 rural settlements, matched by pre-intervention L. longiflocosa indoor density was used to compare three interventions: dip it yourself (DIY) lambda-cyhalothrin LLIN, deltamethrin LLIN, and untreated nets (control). Sand fly indoor density, feeding success, and parity were recorded using CDC light trap collections at 1, 6, 12, and 24 months post-intervention. FINDINGS Both LLINs reduced significantly (74-76%) the indoor density and the proportion of fully engorged sand flies up to two years post-intervention without differences between them. Residual lethal effects of both LLINs and the use of all nets remained high throughout the two-year evaluation period. CONCLUSIONS Both LLINs demonstrated high efficacy against L. longiflocosa indoors. Therefore, the deployment of these LLINs could have a significant impact on the reduction of CL transmission in the sub-Andean region. The DIY lambda-cyhalothrin kit may be used to convert untreated nets to LLINs increasing coverage.

TOXIC ACTIVITY OF PYRETHROIDS IN Lutzomyia longipalpis (DIPTERA: PSYCHODIDAE) FROM MAGDALENA RIVER BASIN, COLOMBIA / Actividad tóxica de piretroides en Lutzomyia longipalpis (Diptera: Psychodidae) procedente del Valle del Magdalena Medio, Colombia

ABSTRACT The study aimed to determine the toxicity of lambda-cyhalothrin, alpha-cypermethrin, and deltamethrin in L. longipalpis, through concentration-mortality bioassays. The test here was performed following WHO guidelines, but instead of using exposure WHO recipients and impregnated papers, 250 ml Wheaton glass bottles treated with 1 ml of insecticide solution were used. Batches of ten females of L. longipalpis were exposed to five concentrations of each pyrethroid that caused between 5 and 100 % mortality in this species. After 1 h of exposure, the females were transferred to observation recipients, and mortality was recorded 24 h later. The lethal concentrations (g/ml) that killed 50 and 95 % (LC50 and LC95) of the exposed L. longipalpis females were 0.05 and 0.86 for lambda-cyhalothrin, 0.24 and 3.62 for alpha-cypermethrin and 0.53 and 4.72 for deltamethrin. Based on the LC50 obtained, lambda-cyhalothrin is the most toxic pyrethroid for L. longipalpis, followed by alpha-cypermethrin and deltamethrin. It is expected that these data may be useful in studies on the effects of sub-lethal concentrations of the three pyrethroids on the behavior of L. longipalpis and studies on the vector susceptibility to these pyrethroids.

RESUMEN El objetivo del estudio fue determinar la toxicidad de los piretroides lambdacialotrina, deltametrina y alfacipermetrina en L. longipalpis, a través de ensayos concentración-mortalidad. Los ensayos se hicieron siguiendo los lineamientos de la OMS, pero en lugar de los recipientes de exposición y de los papeles impregnados de la OMS, se utilizaron botellas de vidrio Wheaton de 250 ml tratadas con 1 ml de solución de insecticida en alcohol absoluto. Grupos de 10 hembras de L. longipalpis sin alimentación sanguínea fueron expuestos a cinco concentraciones de cada piretroide, que causaron entre el 5 y 100 % de mortalidad. Pasada una hora de exposición, las hembras se trasladaron a los recipientes de observación y la mortalidad se registró 24 h después. Las concentraciones (g/ml) que mataron el 50 y el 95 % (CL50 y CL95) de las hembras expuestas de L. longipalpis fueron de 0,05 y 0,86 para la lambdacialotrina, 0,24 y 3,62 para la alfacipermetrina y 0,53 y 4,72 para la deltametrina. Basados en las CL50 obtenidas, la lambdacialotrina fue el piretroide con mayor toxicidad para L. longipalpis, seguido por la alfacipermetrina y la deltametrina. Se espera que estos datos puedan ser útiles en estudios de los efectos de concentraciones sub-letales de los tres piretroides en el comportamiento de L. longipalpis y en estudios de la susceptibilidad del vector a los mismos.

Experimental hut to study the indoor behaviour and effects of insecticide-treated bednets on phlebotomine sand flies (Diptera: Psychodidae)

BACKGROUND Behavioural effects of insecticides on endophagic phlebotomine sand fly vectors of Leishmania are poorly understood mainly because of the lack of an experimental hut (EH) in which to study them. OBJECTIVE To build an EH to evaluate the effects of long-lasting insecticide-treated nets (LLINs) on Lutzomyia longiflocosa. METHODS The study had two phases: (1) Laboratory experiments using tunnel tests to select the traps for the EH; and (2) EH construction and evaluation of the effects of deltamethrin and lambda-cyhalothrin LLINs on L. longiflocosa females inside the EH. FINDINGS Phase 1: The horizontal-slit trap was the best trap. This trap collected the highest percentage of sand flies, and prevented them from escaping. Therefore, this trap was used in the EH. Phase 2: The main effects of LLINs on L. longiflocosa in the EH were: landing inhibition, inhibition from entering the bednet, induced exophily, and high mortality (total and inside exit traps). CONCLUSIONS The EH was effective for evaluating the effects of LLINs on endophagic sand flies. Although both types of LLINs showed high efficacy, the lambda-cyhalothrin-treated LLIN performed better. This is the first report of induced exophily in sand flies.

Entering and exiting behaviour of the phlebotomine sand fly Lutzomyia longiflocosa (Diptera: Psychodidae) in rural houses of the sub-Andean region of Colombia

The present study identified the entering and exiting sites for Lutzomyia longiflocosa in rural houses of the sub-Andean region in Colombia. Entering sites were identified with sticky traps set up outside the bedrooms, around the eave openings, and with cage traps enclosing the slits in the doors and windows inside the bedrooms. Exiting sites were identified by releasing groups of females indoors. These females were blood fed and marked with fluorescent powders. Females were recaptured with the trap placement described above but set up on the opposite sides of the openings. In the entering experiment, a significantly higher number of females were captured in the sticky traps at the zone nearest the eave openings (n = 142) than those captured in the other zones of the trap (n = 52); similarly, a higher number of females were captured on the front side of the house (n = 105) than at the rear side (n = 37). Only two females were collected in the cage trap. In the exiting experiment, at the ceiling, the highest percentage (86.2%) of females was recaptured with sticky traps nearest the eave openings and on the front side of the house (70.0%). Seven females were collected in the cage trap. Lu. longiflocosa entered and exited houses primarily through the eave openings in a non-random pattern in relation to the sides of the house.

Indicadores de sensibilidad de una cepa experimental de Lutzomyia longipalpis (Diptera: Psychodidae) a tres insecticidas de uso en salud pública en Colombia / Discriminating concentrations for three insecticides used in public health in a Lutzomyia longipalpis experimental strain from Colombia

Introducción. En Colombia, las poblaciones periurbanas de Lutzomyia longipalpis,vector del agente causal de la leishmaniasis visceral en el valle alto y medio del río Magdalena, pueden estar expuestas a aplicaciones de insecticidas con diferentes propósitos, por lo que es importante iniciar una vigilancia de la sensibilidad de esta especie a los insecticidas. Objetivo. Determinar en una cepa experimental de L. longipalpis los indicadores de sensibilidad (concentraciones y tiempos diagnósticos) para tres insecticidas de uso común en salud pública: el malatión, la deltametrina y la lambdacialotrina. Materiales y métodos. Se utilizó el método propuesto por los Centers for Disease Control and Prevention. Grupos de 10 a 15 hembras se expusieron a diferentes concentraciones de los insecticidas, utilizando botellas de vidrio de 250 ml como cámaras de prueba. La mortalidad se registró cada cinco minutos durante una hora. Se calcularon las concentraciones y los tiempos diagnósticos para cada insecticida. Resultados. En la cepa evaluada de L. longipalpis, las concentraciones y los tiempos diagnósticos fueron de 75 µg/ml y 25 minutos para el malatión, de 10 µg/ml y 35 minutos para la deltametrina y de 15 µg/ml y 30 minutos para la lambdacialotrina. Conclusión. Se estableció la línea base de la mortalidad frente a tres insecticidas en una cepa sensible del vector L. longipalpis. Estos indicadores permitirán establecer comparaciones con poblaciones del vector expuestas regular o esporádicamente a medidas de control químico y detectar, así, cambios en la sensibilidad de esta especie a los insecticidas.

Introduction: In Colombia, periurban populations of Lutzomyia longipalpis, vector of the causative agent of visceral leishmaniasis in the upper and middle valley of the Magdalena River, may be exposed to insecticide applications with different purposes. Thus, it is important to begin a susceptibility surveillance of this species to insecticides. Objective: To determine indicators of susceptibility to three insecticides habitually used in public health, such as malathion, deltamethrin and lambda-cyhalothrin in an experimental strain of L. longipalpis. Materials and methods: We used the method proposed by the Centers for Disease Control and Prevention. Groups of 10 to 15 unfed females were exposed to different concentrations of the insecticides using 250 ml glass bottles as test chambers. Mortality was registered every five minutes for an hour. Diagnostic concentrations and lethal times for each insecticide were calculated. Results: In the evaluated L. longipalpis strain, the diagnostic concentrations and times were 75 µg/ml and 25 minutes for malathion, 10 µg/ml and 35 minutes for deltamethrin, and 15 µg/ml during 30 minutes for lambda-cyhalothrin. Conclusions: Baseline data over mortality response to three insecticides were established in a susceptibility strain of L. longipalpis vector. These indicators will allow establishing comparisons with populations of L. longipalpis exposed regularly or sporadically to chemical control measures to detect changes in their resistance to these insecticides.

Establishment and characterisation of a new cell line derived from Culex quinquefasciatus (Diptera: Culicidae)

Insect cell cultures are an important biotechnological tool for basic and applied studies. The objective of this work was to establish and characterise a new cell line from Culex quinquefasciatus embryonic tissues. Embryonated eggs were taken as a source of tissue to make explants that were seeded in L-15, Grace's, Grace's/L-15, MM/VP12, Schneider's and DMEM culture media with a pH range from 6.7-6.9 and incubated at 28ºC. The morphological, cytogenetic, biochemical and molecular characteristics of the cell cultures were examined by observing the cell shapes, obtaining the karyotypes, using a cellulose-acetate electrophoretic system and performing random amplified polymorphic DNA-polymerase chain reaction analysis, respectively. The Grace's/L-15 medium provided the optimal nutritional conditions for cell adhesion and proliferation. Approximately 40-60 days following the explant procedure, a confluent monolayer was formed. Cellular morphology in the primary cultures and the subcultures was heterogeneous, but in the monolayer the epithelioid morphology type predominated. A karyotype with a diploid number of six chromosomes (2n = 6) was observed. Isoenzymatic and molecular patterns of the mosquito cell cultures matched those obtained from the immature and adult forms of the same species. Eighteen subcultures were generated. These cell cultures potentially constitute a useful tool for use in biomedical applications.

Breeding sites of Culicoides pachymerus Lutz in the Magdalena River basin, Colombia

The breeding sites of Culicoides pachymerus are described for the first time in western Boyacá Province, Colombia, where this species is a public health problem. In addition to being a nuisance due to its enormous density and its high biting rates, C. pachymerus cause dermatological problems in the human population. Analysis of microhabitats by the sugar flotation technique and the use of emergence traps allowed us to recover 155 larvae of Culicoides spp and 65 adults of C. pachymerus from peridomiciliary muddy substrates formed by springs of water and constant rainwater accumulation. These important findings could aid in the design of integrated control meas-ures against this pest.

Aceptabilidad y eficacia de mosquiteros tratados con insecticida de larga duración Olyset® en un área endémica para malaria en Colombia / Acceptability and efficacy of long-lasting insecticidal nets Olyset® in a malaria endemic area of Colombia

En Colombia, el uso de mosquiteros es promovido por el Programa nacional de prevención y control de enfermedades transmitidas por vectores en áreas endémicas para malaria. A pesar de esto, son pocos los estudios realizados para evaluar su efectividad y en particular el grado de aceptabilidad por los usuarios lo cual es fundamental para mantener la adherencia a esta medida de control. En el presente estudio se evaluó, a pequeña escala, la aceptación de mosquiteros impregnados con insecticida de larga duración (Olyset®) y su efecto biológico en mosquitos, en una localidad de la región pacífica colombiana. Se instalaron 100 mosquiteros Olyset® en 30 viviendas con la recomendación, basados en una encuesta previa, de lavarlos mensualmente. Cuatro, ocho y doce meses después, se aplicó una encuesta en donde se determinó la aceptación teniendo en cuenta: el porcentaje de mosquiteros Olyset® en uso y la percepción de protección de los habitantes contra las picaduras de los mosquitos. Además, en la primera encuesta se indagó sobre los posibles efectos secundarios en la salud de los usuarios por el uso de estos mosquiteros. Grupos de hembras criadas en laboratorio de Anopheles albimanus Wiedemann y Culex quinquefasciatus Say fueron expuestos a los mosquiteros cada cuatro meses para determinar el efecto letal.

La proporción de mosquiteros Olyset® en uso fue disminuyendo en cada evaluación: 77,5%, 51,1% y 46,6% a los cuatro, ocho y doce meses, respectivamente. La misma tendencia fue observada en la percepción de protección contra la picadura de los mosquitos: 82,7%, 62% y 46%, respectivamente. La mortalidad de A. albimanus fue de 100%, 77,8%, 78,6% y 43,7% y la de C. quinquefasciatus de 100%, 42,3%, 74,1% y 5,7% a los cero, cuatro, ocho y doce meses de uso de los mosquiteros, respectivamente. Sólo un 5% de los usuarios manifestó irritación de la piel en los primeros días de uso de estos mosquiteros. En conclusión, durante el año de seguimiento se evidenció una disminución gradual en la aceptación de los mosquiteros Olyset®. Esto probablemente debido a que la notable reducción del efecto letal de los mosquiteros permitió un aumento en las tasas de picadura de los mosquitos que ocasionó la deserción de varios de los usuarios. Sin embargo, no se puede descartar que otras causas hayan contribuido a la reducción en la aceptación.

The use of bednets is promoted by the National Program of Promotion and Prevention of Diseases Transmitted by Vectors in malaria endemic areas of Colombia. This study estimated the acceptance and retention of long-lasting insecticide-treated nets (Olyset®). The study also measured the efficacy of the bednets after being washed once a month. Thirty dwellings were chosen in the village of Beté (Chocó department) to receive bednets. Interviews were administered in four month intervals to determine the frequency of bednet use and to assess the health outcomes. Among the recipients, nets were readily accepted and used at the beginning. However, usage began to decline: 77.5%, 51.1% and 46.6% after 4, 8 and 12 months of use respectively. In addition, 5% of recipients reported skin irritation after 15 days of continuous use. Anopheles albimanus and Culex quinquefasciatus females were exposed to used bednets every four months to estimate mortality and knock down rates. Bioassays revealed a decrease in efficacy over time. A. albimanus mortality was 77.8%, 78.6% and 43.7% after 4, 8 and 12 months of use, respectively. Mortality for C. quinquefasciatus was variable. A. albimanus mean knock down percent was above 80% at each sampling period. C. quinquefasciatus mean knock down percent was at a similar >80% at the 4 and 8 month sampling times, however, declined to 5.7% after 12 months of use. One year of use and monthly washings of bednets results in significantly less acceptance among recipients and a decrease in efficacy.

Flebótomos (Diptera: Psychodidae) del departamento de Guaviare, Colombia, con nuevos registros para el país / Sand flies (Diptera: Psychodidae) of Guaviare Province, Colombia, with 4 new records for the country

Introducción. El registro de casos de leishmaniasis en el departamento de Guaviare evidenció la ausencia de estudios entomológicos dirigidos a identificar las especies de Lutzomyia de esa región del país. Objetivo. Determinar las especies del género Lutzomyia en los cuatro municipios del departamento del Guaviare y señalar por antecedentes vectoriales las especies con posible compromiso en la transmisión de la leishmaniasis. Materiales y métodos. El muestreo se realizó con trampas CDC colgadas entre 1,5 m y 9 m de altura. Además, se recolectaron flebótomos con trampa Shannon y en sitios de reposo. Resultados. Se recolectaron flebótomos pertenecientes a 37 especies; 35 de ellas se registran por primera vez para el departamento del Guaviare y cuatro para el país: L. begonae, L. campbelli, L. sericea y L. nematoducta. Las especies más abundantes fueron L. hirsuta 24,3% (148/610), L. yuilli 15,2% (93/610) y L. davisi 10,3% (63/610), seguidas por L. fartigi, L. carrerai, L. antunesi, L. flaviscutellata y L. olmeca bicolor. Conclusión. Se identificaron siete especies de Lutzomyia como posibles vectores de leishmaniasis.

Introduction. Although cases of leishmaniasis have been reported in the province of Guaviare, Colombia, no entomological studies were included to identify the Lutzomyia sand fly vector species in that area. Objective. Lutzomyia species were identified from four townships of Guaviare. Probable vectors were named based on those species involved in transmission in other areas. Materials and methods. Sampling was undertaken with CDC light traps suspended at heights between 1.5 m and 9 m. Additional sand flies were collected with Shannon traps and by aspiration of adult flies from daytime resting sites. Results. Sand flies belonging to 37 different species were collected. 35 of them were recorded for the first time in Guaviare Province. Four species were new records for Colombia: Lutzomyia begonae, L. campbelli, L. sericea and L. nematoducta. The most abundant species were L. hirsuta 24.3% (148/610), L. yuilli 15.2% (93/610), L. davisi 10.3% (63/610), followed by L. fartigi, L. carrerai, L. antunesi, L. flaviscutellata and L. olmeca bicolor. Conclusion. Seven of these species of have been associated previously with endemic or epidemic transmission of leishmaniasis.

Five new species of Culicoides Latreille described from Colombia, yielding a new species list and country records (Diptera: Ceratopogonidae)

The following five new species of Culicoides from Colombia are described, illustrated and placed to subgenus or species group: Culicoides antioquiensis, Culicoides gabrieli, Culicoides inermis, Culicoides micayensis and Culicoides nigrifemur. C. gabrieli is also known from Peru. When possible, their position in previously published keys is indicated and their features discussed in light of the most recent revisions. A list of 180 Culicoides species known (114) or suspected of being in Colombia (66) is given in a Table. Of these, 12 including the new species are recorded from Colombia for the first time.

Diagnóstico preliminar de la molestia sanitaria causada por Culicoides (Diptera: Ceratopogonidae) / Culicoides biting nuisance (Diptera: Ceratopogonidae) in the province of Boyacá, Colombia

Introducción. Los habitantes del occidente del departamento de Boyacá han reportado molestia sanitaria y problemas dermatológicos ocasionados por la constante picadura de insectos del género Culicoides. Objetivo. Identificar el área de Boyacá afectada por Culicoides, determinar las especies antropofílicas involucradas y su abundancia. Materiales y métodos. Se solicitó información sobre la molestia sanitaria y el registro decasos dermatológicos asociados a la picadura de Culicoides a las autoridades de salud de los municipios que por sus reportes previos o por sus características geográficas se consideraron como potencialmente afectados. En los municipios que informaron sufrir la problemática, se realizó un muestreo entomológico con atrayente humano afuera de las viviendas. Resultados. Se confirmó la gravedad de la molestia en el área rural de nueve municipios ubicados en el flanco occidental de la Cordillera Oriental. Aunque los registros epidemiológicos fueron fragmentados, se estableció que en seis municipios el 11,4 por ciento de los casos (n=2.472) dedermatitis reportados entre el 2003 y el 2005 fueron atribuidos a la picadura de Culicoides. Los resultados entomológicos mostraron que la especie dominante fue Culicoides pachymerus, 99,3 porcentaje de las 3.389 hembras recolectadas, con tasas de picadura (promedios geométricos) por municipio de hasta 52 hembras/persona en 5 minutos. Mediante análisis multivariado, se encontró que la abundancia de esta especie se relaciona negativamente con la altitud. Conclusiones. Por su dominancia y altas tasas de picadura, C. pachymerus es muy probablemente la especie responsable de la molestia sanitaria y los problemas dermatológicos causados por Culicoides en el departamento de Boyacá.

Presencia en el peridomicilio de vectores infectados con Leishmania (Viannia) panamensis en dos focos endémicos en el occidente de Boyacá, piedemonte del valle del Magdalena medio, Colombia / Presence of infected vectors of Leishmania (V. ) panamensis within dwellings in two endemic foci in the foothill of the middle Magdalena valley, western Boyacá, Colombia

Introducción. En el departamento de Boyacá, los casos de leishmaniasis registrados de 1997 a 2003 muestran un aumento en la incidencia a partir del año 2000 que puede corresponder a una epidemia en el occidente del departamento. Además, la distribución de casos por sexo y edad sugiere transmisión domiciliar. Objetivo. Definir los vectores de leishmaniasis cutánea en los municipios de Otanche y Pauna , por su asociación con el domicilio y por su infección natural con la misma especie de Leishmania aislada de pacientes. Materiales y métodos. Se recolectaron ejemplares de Lutzomyia con trampas CDC en el intra y peridomicilio. La identificación del parásito se hizo, mediante PCR, a partir de muestras de pacientes y en grupos de hembras de las especies de Lutzomyia más abundantes. Además se confirmó la especie de parásito en muestras de pacientes por anticuerpos monoclonales. Resultados. En los dos municipios, L. trapidoi fue la especie antropofílica mas abundante en y alrededor de las viviendas. L. hartmanni y L. yuilli fueron también abundantes en Otanche; y, L. gomezi y L. panamensis en Pauna . Leishmania (V.) panamensis se identificó tanto en pacientes como en los flebótomos: L. yuilli, L. gomezi y L. panamensis. Conclusión. Nuestros resultados confirman la presencia de vectores de Leishmania panamensis infectados naturalmente, en las viviendas de los municipios de Otanche y Pauna del Occidente de Boyacá. L. trapidoi por ser la especie más abundante puede ser considerada como el vector principal. La evidencia de transmisión doméstica permite planear la aplicación de medidas de control vectorial a este nivel.

Introduction. Case records of leishmaniasis of the years 1997 to 2003 of the department of Boyaca showed that since the year 2000 the department experienced an unusual rise in the incidence of cutaneous leishmaniasis that might correspond to an epidemic outbreak in the western region of the department. Age and gender distribution of cases supported a domestic transmission. Objective. This research was designed to identify the vectors of cutaneous leishmaniasis in the municipalities of Otanche and Pauna through their presence in dwellings and their natural infection with the same species of Leishmania isolated from patients. Material and methods. Sampling of sand flies was done with CDC traps in and around dwellings. Samples from patients and pooled females of the most abundant species of Lutzomyia were used to identify the parasite by PCR. Monoclonal antibody typing was also used to confirm the identification of the parasite in samples from patients. Results. In both municipalities L. trapidoi was the most abundant anthropophilic species of Lutzomyia indoors and around dwellings. L. hartmanni and L. yuilli were also abundant in Otanche, and L. gomezi and L. panamensis in Pauna . Leishmania (V) panamensis was identified both in patients and in the sand flies: L.yuilli, L. gomezi and L. panamensis.. Conclusion. Our findings prove the presence of infected vectors of Leishmania panamensis within dwellings in the towns of Otanche and Pauna in Western Boyacá. Since L. trapidoi was the most abundant species, it may be considered as the principal vector of Leishmania (V.) panamensis. The evidence of transmission within human dwellings warrants vector control at least in this environment.

Validación de la PCR en la detección de parásitos de Leishmania (Viannia) spp. en Lutzomyia (Diptera: Psychodidae) como herramienta en la definición de especies vectores / Validation of PCR as a tool for the detection of Leishmania (Vianna) spp. parasites in the Lutzomyia (Diptera: Psychodidae) vector

Introducción. En leishmaniasis se acepta que la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) ha simplificado el proceso de incriminación vectorial. Sin embargo, pocas veces se ha determinado la sensibilidad y la especificidad de cada PCR en la detección y la identificación del parásito en los flebótomos. Objetivo. Evaluar la aplicabilidad de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), basada en los iniciadores B1 y B2, en la detección e identificación de parásitos de Leishmania (Viannia) en insectos vectores enteros sin disecar. Metodología. Se determinó la sensibilidad y la especificidad de la PCR empleando diluciones de cultivo de parásitos de Leishmania spp. Se estableció el número máximo de hembras de Lutzomyia que pueden ser procesadas a la vez sin disminuir la sensibilidad de la PCR, procesando el ADN de grupos de una a cinco hembras de Lutzomyia en presencia del ADN de las diluciones de cultivo de parásitos. Además, se comparó en grupos de flebótomos infectados experimentalmente, la sensibilidad de esta PCR en la detección de infección por Leishmania (Viannia) frente al método de búsqueda de flagelados por disección del insecto y examen microscópico. Resultados. La PCR detectó desde un parásito de Leishmania (Viannia) y permitió el procesamiento de hasta tres insectos enteros sin alterar la sensibilidad. Los porcentajes de infección experimental detectados con las dos técnicas fueron similares, 33,3 por ciento con la PCR y 30 por ciento con el examen microscópico. Además, se confirmó que los iniciadores B1 y B2 son específicos para especies del subgénero Leishmania (Viannia). Conclusión. Los resultados obtenidos demuestran la sensibilidad y la especificidad de esta PCR y permiten recomendar su uso en la determinación de infección natural con parásitos de Leishmania (Viannia) en poblaciones silvestres de flebótomos

Estandarización del método propuesto por la Organización Mundial de la Salud para determinar los niveles de susceptibilidad de los vectores de leishmaniais a insecticidas / Standardization of WHO - proposed method for determining susceptibility levels of leishmaniasis vectors to insecticides

El objetivo de este estudio fue estandarizar el método OMS para determinar susceptibilidad a insecticidas en algunas especies de Lutzomyia en condiciones de laboratorio y de campo. Los ensayos biológicos se realizaron sin insecticidas, únicamente con tratamientos controles para determinar mortalidad por manipulación y otras condiciones desfavorables para cada especie. Se emplearon hembras de tres colonias de laboratorio: dos cepas de Lutzomyia longipalpis y una de Lutzomyia serrana. También se incluyeron en el estudio hembras silvestres de Lutzomyia quasitownsendi. Se emplearon dos tipos de métodos: el método OMS y el método OMS-adaptado; este último consistió en reemplazar el tubo OMS para el período posexposición por un contenedor plástico con yeso humedecido. Para cada método se ensayaron tres tipos de papeles: papel impregnado con aceite de oliva, papel impregnado con aceite de silicona y papel sin aditivos. La variable por medir fue el porcentaje de mortalidad a las 24 h. El método OMS resultó conveniente para las dos cepas de L. logipalpis con una mortalidad entre 0 y 10 por ciento, pero registró una mortalidad elevada en L. serrana (20-80 por ciento) y L. quasitownsendi silvestres (10-50 por ciento). Con el médtodo OMS - modificado, la mortalidad promedio fue inferior a 4 por ciento en todas las especies ensayadas. Con respecto al tipo de papel, no se encontraron variaciones importantes. Según los resultados, el recipiente utilizado en el periodo posexposición afecta la supervivencia de los flebótomos y de manera variable para cada especie. Al establecer líneas base de susceptibilidad a insecticidas en especies del género Lutzomyia, se recomienda el uso del método OMS para L. longipalpis y del método OMS - modificado para L. serrana, L. Quasitownsendi y especies cercanas

Lutzomyia longiflocosa (Diptera: Psychodidae) posible vector en el foco de leishmaniasis cutánea del municipio de Planadas, zona cafetera del Tolima / Lutzomyia longiflocosa (Diptera: Psychodidae), suspected vector at a focus of cutaneous leishmaniasis in Planadas, coffe plantation area of Tolima

Debido al incremento en los registros de casos de leishmaniasis cutánea (LC) en el municipio de Planadas, zona cafetera de la cordillera central (353 casos x 100.000 habitantes durante 1998), se realizó un estudio piloto para reconocer las especies del genero Lutzomyia presentes en la zona y seleccionar los posibles vectores de leishmaniasis cutánea. Se realizaron 4 capturas nocturnas de los flebótomos en las veredas La Floresta. La Aldea y el resguardo indígena de Gaitania. Se utilizaron trampas CDC, cebo humano protegido y trampa Shannon. En los 2.849 ejemplares identificados se encontraron 5 especies, tres de ellas pertenecientes al grupo verrucarum de gran importancia en salud pública. L. longiflocosa (98,5 por ciento) predominante en todos los sitios, se reconoce como una especie antropofílica y con antecedentes de posible vector de LC en el departamento de Huila, Colombia. L. nuñeztovari (0,7 por ciento), presente en intra y peridomicilio, es reconocida porque su variedad L.n anglesi se incriminó como vector de Leishmania (V) braziliensis en Bolivia. L. columbiana (0,1 por ciento), con antecedentes de posible vector L. mexicana y de Bartonella bacilliformis en Nariño, Colombia, se registró en el intradomicilio y en el peridomicilio. Otros flebótomus encontrados fueron una especie del subgénero Helcocyrtomyia (0,4 por ciento) y L shannoni (0,3 por ciento). Trescientos setenta y nueve flebótomos fueron disecados sin hallar infección natural. Basados en la abundancia de flebótomus encontrada para esta zona, su comportamiento antropofílico y antecedentes vectoriales, se considera a L. longiflocosa como la especie más comprometida en la transmisión de LC en el municipio de Planadas, Tolima

Competencia vectorial de las especies de Lutzomyia del grupo verrucarum (Diptera, Psychodidae) en un foco endémico de Leishmania braziliensis en Reventones, Cundinamarca / Vectorial compentence of Lutzomyia species from the verrucarum (Diptera, Psychodidae) group found in a Leishmania braziliensis endemic focus in Reventones, Cundinamarca

Cinco grupos de hembras silvestres de Lutzomyia del grupo verrucarum (Lutzomyia torvida, Lutzomyia ovallesi y Lutzomyia nuñeztovari) presentes en la zona cafetera de Reventones, Cundinamarca, donde Leishmania braziliensis es endémica, se infectaron experimentalmente con el fin de determinar la susceptibilidad a infectarse y la capacidad para transmitir el parásito por picadura a un hospedero. Las hembras de las tres especies, reunidas en la misma jaula, se alimentaron a través de membrana de piel de pollo con una mezcla de promastigotes de cultivo de L. braziliensis y eritrocitos humanos lavados. El porcentaje de infección se determinó por observación directa al microscopio de formas flageladas en los intestinos de las hembras disecadas, entre 4 y 7 días después de la comida infectiva. En los dos primeros grupos, se registró únicamente la susceptibilidad de estas especies a infectarse con L. braziliensis. En los tres grupos restantes, además de observar la susceptibilidad, las hembras alimentadas que sobrevivieron a la oviposición se alimentaron por segunda vez en hámster sano con el fin de intentar la transmisión del parásito por picadura. Las tasas de infección generales obtenidas en los cinco grupos estuvieron entre 23,9 y 70,2 por ciento. Las tres especies se infectaron experimentalmente con L. braziliensis, siendo Lu. torvida la más abundante en los ensayos, seguida de Lu. ovallesi. Lu. nuñeztovari se encontró presente en la mayoría de los grupos en una densidad muy baja. No se detectó la presencia de la forma amastigota en ninguno de los hámsteres analizados. Estos resultados indican que las tres especies son susceptibles a infectarse con L. braziliensis, que pueden estar involucradas en el ciclo de transmisión del parásito en el foco de Reventones, Cundinamarca, y por ahora se consideran como vectores potenciales